【用法與判定】
1 用法
1.1 樣品處理及模板準備
推薦采用廣州悅洋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的病毒 DNA/RNA 提取試劑盒,按照說明書進行操作。
1.2 熒光 PCR 擴增
開機預(yù)熱并檢驗儀器性能后,取PCR 反應(yīng)管分別加入5 微升提取好的核酸和陰陽對照,標記后
放置在熒光PCR 樣品槽相應(yīng)位置,記錄順序,按下表2 設(shè)置擴增參數(shù),進行PCR 擴增。
2 判定
2.1 合理調(diào)整閾值線,不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。
2.2 試劑盒有效性判定
·陰性對照:無Ct 值,線形為直線或微斜,無明顯指數(shù)增長。
·陽性對照:FAM(貓皰疹 1 型病毒)和 HEX(貓杯狀病毒)通道Ct 值≤30,有明顯指數(shù)增長,呈典型的S 型曲線。
2.3 樣本結(jié)果判定
陽性:檢測通道 Ct 值≤38,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑:檢測通道 38<Ct 值≤40 ,建議重復(fù)試驗,重復(fù)試驗結(jié)果仍為 38<Ct 值≤40 和明顯擴增曲線者為陽性,否則為陰性。
陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。
(更詳細資料請參照說明書)